Visualiser La Traduction Dans Les Cellules Vivantes - Montpellier, France - Université de Montpellier

Université de Montpellier

Entreprise vérifiée

Montpellier, France

il y a 3 semaines

Posté par:

Sophie Dupont

beBee Recruiter

Description

**Visualiser la traduction dans les cellules vivantes // Visualize translation in live cells**:

- Réf **ABG-122687**
**ADUM-56181**
- Sujet de Thèse- 11/04/2024- Contrat doctoral- Université de Montpellier- Lieu de travail- Montpellier CEDEX 5 - France- Intitulé du sujet- Visualiser la traduction dans les cellules vivantes // Visualize translation in live cells- Mots clés- Régulation des gènes, traduction des ARNm, localisation des ARN, imagerie de biosenseur fluorescent, pathologies neuronales
- Gene regulation, mRNA translation;, mRNA localization, fluorescent biosensor imaging, neuronal pathologies**Description du sujet**:

- Visualiser la traduction dans les cellules vivantes
- La traduction est une étape fondamentale de l'expression des gènes qui permet une grande partie de la régulation génique, que ce soit au niveau d'un ARNm spécifique ou de l'ensemble du transcriptome. Les chercheurs ont déployé des décennies d'efforts pour développer des technologies permettant de mesurer la traduction. Nous avons maintenant des méthodes biochimiques puissantes, telles que le Ribo-Seq. Nous disposons également de méthodes de microscopie pour visualiser la traduction de molécule uniques d'ARNm, qui ont été développées par plusieurs équipes dont la nôtre (1). Ces méthodes ont profondément changé l'étude de la traduction. Cependant, malgré ces progrès, il est toujours aussi difficile de visualiser la traduction du transcriptome dans son ensemble. Or, ceci est très important car la traduction est régulée à l'échelle du transcriptome entier par des voies cellulaires clés telles que la signalisation mTOR, qui régule la croissance cellulaire en fonction des nutriments. En visualisant de manière globale la traduction dans les cellules vivantes, il sera possible de dire quand et où la traduction se produit, et ainsi d'accéder à de nouvelles informations, telles que: (i) la variation de la quantité de synthèse protéique d'une cellule à l'autre; (ii) la régulation temporelle de la traduction au niveau de cellules uniques; (iii) l'identification des compartiments intracellulaires dans lesquels la traduction se produit.- Les objectifs spécifiques de la thèse sont les suivants:

- 1-Développement du biosenseur traductionnel dans les cellules humaines. Le premier but sera de tester différentes versions du biosenseur pour optimiser sa sensibilité. Ceci se fera en construisant des lignées cellulaires HEK293 exprimant le biosenseur de manière stable par CRISPR knock-in. Le deuxième but sera de mesurer la variabilité de la traduction d'une cellule à l'autre, les variations de traduction le long du cycle cellulaire, ainsi que d'identifier les compartiments intra-cellulaires où la traduction a lieu (2).
- 2-Utilisation du biosenseur traductionnel dans les neurones pour comprendre le FXS. Dans les neurones, la traduction locale de certains ARNm dans les dendrites et les axones joue un rôle essentiel dans les fonctions neuronales (5). Ainsi, plusieurs maladies neurologiques d'origine génétique sont causées par une altération de la traduction locale au niveau des synapses, comme dans le cas du FXS. Des cellules ES seront modifiées par CRISPR knock-in pour introduire le biosenseur, et ces cellules seront différenciées en neurones pour mesurer la dynamique de la traduction au niveau des synapses, avant et après leur activation, et en comparant des neurones sauvages à des neurones mutants FXS. Ceci aidera à comprendre comment la traduction locale contribue à la fonction neuronale, et comment une modification de ce processus conduit à des maladies comme le FXS.
Visualize translation in live cells- The specific aims are the following:

- 1-Biosensor development in human cells. The first goal will be to test different versions of the biosensor to optimize its sensitivity. This will be done by constructing HEK293 cell lines stably expressing the biosensor by CRISPR knock-in. The second goal will be to measure the variability of translation from one cell to another, the variations of translation along the cell cycle, as well as to identify the compartments where translation takes place (2).
- 2-Use of the translational biosensor in neurons to understand FXS. The localization of mRNA in specific sub-cellular compartments plays important roles in the cell (2, 3, 4). In neurons, local translation of some mRNAs in dendrites and axons has been found to play essential roles in neuronal functions (5). Indeed, several neurological diseases of genetic origin are caused by an altered local translation at the synapses, as in the cases of the Fragile X Syndrome (FXS). Thus, ES cells will be modified by CRISPR knock-in to introduce the biosensor, and then differentiated in neurons to measure translation dynamics at synapses, before and after synapse activation, and to compare wild-type to FXS mutant neurons. This will help to understand how local translation contribute to neuronal funct