Rôle Des Vésicules Extracellulaires Dans La - Angers, France - Mitovasc

Description

**Rôle des vésicules extracellulaires dans la communication neurones-cellules tumorales dans le cancer bronchopulmonaire**:

- Réf
- **ABG-116445**
- Stage master 2 / Ingénieur- Durée 6 mois- Salaire net mensuel Gratification selon la réglementation en vigu- 06/09/2023- Mitovasc- Lieu de travail- Angers Pays de la Loire France- Champs scientifiques- Biologie
- Santé, médecine humaine, vétérinaire
- Mots clés- Oncologie, microenvironnement tumoral, pharmacologie**Établissement recruteur**:
**Site web**:
MITOVASC was founded from the association of several groups sharing common scientific goals, which are to provide better understanding of the interactions between the small arteries controlling blood flow supply and the contribution of mitochondria to cell metabolism.

**Description**:

- Le cancer broncho-pulmonaire est un des cancers solides le plus fréquent, qui, en dépit des progrès thérapeutiques récents, reste de mauvais pronostic. Le microenvironnement tumoral joue un rôle fondamental dans les processus tumoraux et de chimiorésistance. Récemment, un nouvel acteur du microenvironnement a été mis en évidence : l'innervation intrinsèque des tumeurs. Cette innervation composée de fibres nerveuses autonomes et sensitives module la cancérogénèse et la dissémination tumorale. Ces processus ont largement été étudiés dans le cadre du cancer prostatique, du sein et du pancréas. Nous émettons l'hypothèse qu'une communication fine entre les neurones et les cellules tumorales bronchiques existe également et notamment par l'intermédiaire des vésicules extracellulaires (VEs). Afin de pouvoir caractériser quantitativement et qualitativement ces VEs, nous souhaitons développer des méthodes innovantes de caractérisation des VEs basées sur la cytométrie en flux et la PCR digitale. Dans ce contexte, ce stage fera l'objet d'une collaboration étroite avec la plateforme d'analyse PaCeM pour le développement de nouvelles méthodes d'analyses des VEs. L'objectif principal de ce projet est d'évaluer la production de VEs des cellules cancéreuses bronchiques en réponse à des neurotransmetteurs ou en co-culture avec des neurones et de développer des approches technologiques innovantes pour leurs études.Pour répondre à cet objectif, le projet sera mené dans un premier temps sur une lignée cellulaire de cancer bronchique (A549). Les VEs seront isolées après 24, 48 ou 72 heures de traitement par les neuromédiateurs (noradrénaline, acétylcholine, substance P et CGRP). L'isolement se fera par centrifugation différentielle du milieu de culture. Une fois isolées, les VEs seront caractérisées par analyse des marqueurs exosomaux (CD9, CD81, CD63, TSG101, ALIX, Flotilin-1) et de microvésicules (Annexine A1) par western blot, par cytométrie en flux, par détermination de leur taille et concentration par analyse du suivi individuel de particules, et par analyse morphologique par microscopie électronique.
- Dans un second temps, une stratégie de co-culture de cellules A549 et de cellules neuronales SH-SY5Y sera également mise en place afin d'évaluer l'interaction entre les deux types de cellules. Les VEs seront également isolées à partir de cette co-culture et caractérisées comme décrit précédemment. La collaboration avec la plateforme PACeM présente un enjeu crucial dans ce travail puisque nous souhaitons discriminer avec précision la provenance neuronale ou tumorale des VEs. Ainsi, de nouvelles stratégies technologiques seront mises au point dans ce sens par une approche de tri des VEs par cytométrie en flux en nous basant sur des marqueurs de surface des cellules tumorales (muc1) et neuronales (synaptophysine). Des réglages techniques spécifiques seront préalablement effectués sur le cytomètre pour la réalisation de ces expériences sensibles (Kormelink et al.,2016). Puis des essais seront réalisés avec des vésicules synthétiques mimant les VEs (Verity Shells, Exometry) pour s'assurer d'une bonne calibration de l'appareil et de résultats fiables et reproductibles.- Par ailleurs, une analyse des exosomes, les plus petites des VEs en taille, par la technique de PCR digitale sera développée. La PCR digitale et notamment la ddPCR acquise récemment par la plateforme PACeM, est une technologie permettant la quantification des acides nucléiques, après amplification et l'utilisation de sondes fluorescentes. L'originalité est ici de détourner les fonctionnalités premières pour utiliser la détection de fluorescence, et le lecteur de ddPCR (« cytomètre like ») pour essayer de quantifier les exosomes avec un anticorps fluorescent ou une sonde membranaire.**Profil**:
Bases théoriques solides en oncologie

Culture cellulaire

Autonomie, travail en équipe

**Prise de fonction**:

- 02/01/2024